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细胞培养中组织培养的污染是如何消除的?
文章来源:江苏麦莎实业有限公司   添加时间:2020/10/27 10:01:57 点击率:1355

细胞培养技术也叫细胞克隆技术,在生物学中的正规名词为细胞培养技术。不论对于整个生物工程技术,还是其中之一的生物克隆技术来说,细胞培养都是一个必不可少的过程。

当细胞培养中组织培养被污染的时候,研究者会试图消除或控制污染。首先,确定污染物是细菌、真菌、支原体或酵母,把污染细胞与其它细胞系隔离开,用实验室消毒剂消毒培养器皿和超净台,检查HEPA过滤器。 高浓度的抗生素和抗霉菌素可能对一些细胞系有毒性,因而,做剂量反应实验确定抗生素和抗霉菌素产生毒性的剂量水平。这点在使用抗生素如两性霉素B和抗霉菌素如泰乐菌素时尤其重要。下面是为您推荐确定毒性水平和消除培养污染的实验步骤:

1. 在无抗生素的培养基中消化、计数和稀释细胞,稀释到常规细胞传代的浓度。

2. 分散细胞悬液到多孔培养板中,或几个小培养瓶中。在一个浓度梯度范围内,把选择抗生素加入到每一个孔中。例如,两性霉素B推荐下列浓度,0.25,0.50,1.0,2.0,4.0,8.0 mg/ml。

3. 每天观测细胞毒性指标,如脱落,出现空泡,汇合度下降和变圆。  

4. 确定抗生素毒性水平后,使用低于毒性浓度2~3倍浓度的抗生素的培养液培养细胞2~3代。

5. 在无抗生素的培养基中培养细胞一代。

6. 重复步骤4。

7. 在无抗生素的培养基中培养4~6代,确定污染是否以已被消除。


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